Civa ve gümüşün sıçan karaciğer nad(p)h:kuinon oksidoredüktaz 1 enzimi üzerine in vitro etkileri

Abstract

Kirlenmiş toprak ve sularda bulunan ağır metallerin sağlığa zararlı olduğu bilinmektedir. Bu çalışmada, civa ve gümüşün ksenobiyotik kuinonların detoksifikasyonunda rol alan ve antioksidan olarak da görev yapabilen NAD(P)H:Kuinon Oksidoredüktaz 1 (NQO1) enzimi üzerine in vitro etkileri incelenmiştir. Sıçan karaciğerleri homojenize edildikten sonra sitozolik fraksiyonlar diferansiyel santrifügasyon yöntemiyle elde edildi. NQO1 substratı olarak 2,6-diklorofenolindofenol (DCPIP) kullanıldı ve 600 nanometrede azalan absorbans spektrofotometrik olarak gözlemlendi. Civa ve gümüşün NQO1 üzerine etkisi, bu metallerin 10 µM ile 150 µM arasında değişen konsantrasyonları kullanılarak incelendi. Elde edilen data ile önce her iki metalin de IC50 değerleri bulundu, sonra çizilen Lineweaver-Burk ve Dixon grafiklerinden Km, Vmax ve KI değerleri hesaplanarak inhibisyon tipleri belirlendi. Civanın NQO1 enzimi için IC50 değeri 60.7 µM; gümüşün NQO1 enzimi için IC50 değeri 30.36 µM olarak bulundu. Lineweaver-Burk grafiklerinden belirlendiği üzere civa NQO1 enzimini nonkompetitif tarzda inhibe ederken (Vmax azalırken Km sabit kaldı) gümüş bu enzimi kompetitif tarzda inhibe etmiştir (Vmax sabit kalırken Km arttı). KI değerleri ise civa için 87 µM gümüş için 19.2 µM olarak hesaplandı. Sonuç olarak, kirlenmiş sulardaki ağır metallerin başında gelen civa ve gümüşün NQO1 enzimi üzerindeki inhibe ediciliği, enzimin ksenobiyotik kuinonların detoksifikasyonunda önemli ölçüde azalmaya sebebiyet vereceğinden ksenobiyotik kuinonların zararları daha fazla görülebilecektir.